Kiểm tra MTT

Thử nghiệm MTT dựa trên sự phân cắt của muối tetrazolium màu vàng MTT để tạo thành formazan màu tím. giảm số lượng tế bào sống sót làm giảm hoạt động trao đổi chất trong các mẫu cấy thử nghiệm. sự giảm này liên quan trực tiếp đến lượng formazan màu tím được tạo thành, như được thấy bằng cách hấp thụ.

Sự tăng sinh tế bào với xét nghiệm MTT và khả năng sống sót của tế bào sau khi xử lý thuốc thử được xác định bằng phương pháp so màu.

đánh giá khả năng sống của tế bào bằng phương pháp chiết xuất và nhuộm mtt

• Vật phẩm thử nghiệm được chiết xuất trong điều kiện lắc trong một thời gian xác định trong dmem bổ sung 37% fbs ở 1 +/- 10 ° C và 1929 tế bào được ủ với dịch chiết.
• just trước khi kết thúc thời gian ủ bệnh, các tế bào được đánh giá bằng kính hiển vi và thuốc thử mtt được thêm vào. tế bào được ủ trong khoảng 2 giờ. sau đó, dung dịch hòa tan (hcl) được thêm vào mỗi giếng và xác định độ hấp thụ ở bước sóng 570nm (bước sóng tiêu chuẩn 650nm).
• khả năng sống sót của các mẫu cấy đã xử lý được xử lý bằng dịch chiết thử nghiệm thấp hơn 70% so với các mẫu cấy đối chứng không được xử lý (đối chứng dung môi ) được coi là có tác dụng gây độc tế bào rõ ràng theo iso 10993-5.

giao thức

dòng ô

tế bào l929 (số atcc ccl1, dòng nctc 929 (mô liên kết của chuột), dòng vô tính l (dsmz))

nghiên cứu

Thử nghiệm MTT dựa trên sự phân cắt của muối tetrazolium màu vàng MTT để tạo thành formazan màu tím.

nồng độ

4 nồng độ của chất chiết xuất được thử nghiệm: 29,6%, 44,4%, 66,7% và 100%

thời gian trích xuất

37-1 giờ ở 4 ± 72 ° c

– 4 giờ (tiếp xúc ngắn và da hoặc niêm mạc còn nguyên vẹn) 24 ± 2 giờ (tiếp xúc với bệnh nhân trong thời gian ngắn và hạn chế) 72 ± 2 giờ (tiếp xúc kéo dài và lâu dài)

p>

thời gian ủ bệnh

37-1 giờ ở 24 ± 72 ° c

kiểm soát chất lượng

kiểm soát dung môi: dmem 10% fbs

kiểm soát âm tính: polypropylene được chiết xuất trong dmem 10% fbs

kiểm soát tích cực: chiết xuất latex trong dmem 10% fbs

cung cấp dữ liệu

khả năng sống sót của tế bào được xác định bằng độ hấp thụ ở bước sóng 570 nm (bước sóng tham chiếu 650 nm)

tiên lượng tích cực

Khả năng sống sót của các mẫu cấy được xử lý bằng dịch chiết thử nghiệm thấp hơn 70% so với các mẫu cấy đối chứng không được xử lý (đối chứng bằng dung môi) vì có tác dụng gây độc tế bào rõ ràng.